猪人工授精技术操作规范

1 范围

本标准规定了猪人工授精技术的实验室与采精室建设、种公猪的调教与采精、精液品质检查、稀释液的配制、精液的稀释、保存和运输以及输精等技术要点。
  本标准适用于猪人工授精技术操作。

2 实验室与采精室的建设
2．1实验室建设与管理
2．1．1 实验室要求与采精室相邻，墙上设高40cm×宽60cm窗口与采精室相通，窗口二侧设透明活动门，窗内温度控制在36—37℃。
2．1．2实验室地面铺设防滑地砖，工作台和室内四周的墙壁应贴磁砖。工作人员应保持实验室的整洁、干净、卫生，每周彻底清洁一次，地面每周消毒一次，实验室门口设消毒池，每天更换消毒液，室内应安装紫外线灯，每天下班时开启，通宵照射。
2．1．3实验室分成干燥区和潮湿区，干燥区用于稀释液的配制和精液的检查、稀释、分装，潮湿区安放水槽，用于清洗器械和制备双蒸水。
2．1．4 非实验室工作人员不准进入实验室。
2．1．5各种电器设备应按其要求选择相应插座，除冰箱、精液保存箱、恒温培养箱等外，一般电器要求人走电断，干燥箱无人时设定温度不应高于100℃；
2．1．6器械的清洗与消毒
2．1．6．1尽量使用一次性用品，对于不能用一次性用品代替的器械使用后必须清洗消毒。
2．1．6．2器械的清洗方法：所有器械应以洗洁精或其它去污剂清洗，用自来水冲洗干净，再用蒸馏水漂洗二遍。
2．1．6．3器械的消毒方法：玻璃、金属类器械可采用高压蒸汽10—15分钟消毒。对于不能用高压蒸汽消毒而又不便于煮沸消毒的器械，可用湿热蒸汽30分钟消毒。
2．2采精室的建设与管理
2．2．1采精室应与实验室相邻，面积大约10平方米，地面要求平整、防滑、清洁。
2．2．2采精室中间放采精架，采精架的后方地面放置防滑垫（麻袋）。左右两边用直径10厘米钢管隔开作为安全区，钢管高0.75米，距墙壁0.6米，间隔0.3米。
2．2．3每次采精后必须清洗地面，特别清除精液胶体，采精室内安装紫外线灯，下班时开启，通宵照射消毒。
3   种公猪的调教与采精
3．1种公猪的调教
3．1．1对种公猪进行调教时应做到胆大心细、动作轻柔、环境安静，禁止粗暴对待种公猪，避免形成不良的条件反射。
3．1．2后备公猪8月龄开始调教，每天一次，每次15—20分钟。调教成功后应连续采精2—3天，以形成条件反射。
3．1．3在台畜背部洒上发情母猪的尿液，能有效刺激新公猪的性欲，促使其爬跨。
3．1．4让新公猪经历几次自然交配或观察其它公猪的爬跨动作，有利于调教。
3．1．5先让新公猪爬跨发情母猪，以激发公猪的性欲，待公猪阴茎充分勃起，性欲十分旺盛时将母猪赶走，引导公猪爬跨台畜。
3．1．6经过上述方法训练调教仍不能爬跨的，则放弃对该公猪的调教。
3．2采精
3．2．1采精员一手带双层手套，另一手持37℃保温杯(内装1次性食品袋)用于收集精液。
3．2．2饲养员将待采精的公猪赶至采精栏，用0.1%高锰酸钾溶液清洗其腹部和包皮，再用温水（夏天用自来水）清洗干净，避免药物残留对精子的伤害。
３．2．3采精员挤出公猪包皮积液，按摩公猪包皮部，刺激其爬跨假台畜，待公猪爬跨逐步伸出阴茎，脱去外层手套，将公猪阴茎龟头导入空拳，轻握龟头，让其抽动片刻，然后紧握公猪阴茎螺旋状龟头，不让其转动并顺其向前冲力将阴茎顺势拉出。
3．2．4在射精前，有节奏的按压龟头能促进射精，弃去最初射出的清亮液体部分，用四层沙布或过滤纸过滤收集浓份精液。当公猪停止射精时可再次有节奏按压龟头，促使公猪第二、三次射精。不能让精液顺手指流入集精杯中，禁止中途终止采精。
3．2．5采精员应注意安全，一旦公猪出现攻击行为，采精员应立刻避至安全角。
3．2．6采精频率：成年公猪每周1—2次，青年公猪每周1次。
4 精液的品质检查
4．1精液量：以电子天平称量精液，按每克1毫升计，避免以量筒等转移精液盛放容器的方法而造成精液的污染。
4．2颜色：正常的精液是乳白色或浅灰白，精子密度越高，色泽愈浓，其透明度愈低。如带有绿色或黄色是混有脓液或尿液，若带有淡红色或红褐色是含有血液。这样的精液应舍弃不用，并会同兽医查找原因。
4．3气味：猪精液略带腥味，如有异常气味，则废弃。
4．4pH值：用PH试纸测定PH值，用滴管吸取一滴精液滴在试纸上，1分钟后与标准比色版对比，确定PH值。也可用PH计测量（PH计使用见说明书）。
4．5精子活率检查：在37℃环境温度、400倍显微镜下对精子活率进行检查，活率是指呈直线运动的精子百分率，在显微镜下观察精子活率，按0.1--1.0 的十级评分法进行，鲜精活率要求不低于0.7。
4．6精子密度：指每毫升精液中所含的精子数，是确定稀释倍数的重要指标。要求用血细胞计数板进行计数或精液密度仪测定。有经验的技术人员可以应用目测法，但每一个月必须对精子进行一次密度测定。
4．7精子畸形率：必须对新公猪的最初几次射精进行形态检查，以后每个月检查一次。畸形率是指异常精子的百分率，要求畸形率不超过18％，先对精液进行伊红或姬姆萨氏染色，相差显微镜下可直接观察活精子的畸形率，畸形精子种类有：巨型精子、短小精子、双头或双尾精子，顶体膨胀或脱落、精子头部残缺或与尾部分离、尾部变曲。
4．8对精液品质检查结果进行详细的登记。
5 稀释液的配制和精液的稀释
5．1稀释液的配制
5．1．1配制稀释液的药品选用分析纯试剂，对含有结晶水的试剂要按摩尔浓度进行换算（如含水葡萄糖和无水葡萄糖）。
5．1．2按稀释液配方，准确称量药品，将称量好的稀释粉溶于定量的双蒸水中，用磁力搅拌器助其溶解。
5．1．3液态状稀释液冰箱4℃保存，不得超过24小时，超过有效贮存期的变质稀释液应废弃。
5．2精液的稀释
5．2．1精液采集后应尽快稀释，原精液贮存不超过30分钟。
5．2．2稀释液与精液要求等温，两者温差不超过1℃，以精液温度为标准来调节稀释液的温度，绝不能反过来操作。
5．2．3稀释时，尽量减少精液的转移，将稀释液沿杯(瓶)壁缓慢加入到精液中，然后轻轻摇动或用消毒玻璃棒搅拌，使之混合均匀。如作高倍稀释时，应先进行低倍稀释（1：1-2），稍待片刻后再将余下的稀释液沿壁缓慢加入，以防造成“稀释打击”。
5．2．4稀释倍数的确定：活率≥0.7的精液，按每个输精剂量含40亿个总精子，输精量为80-90ml确定稀释倍数。
5．2．5稀释后要求静置片刻再作一次精子活力检查，如果稀释前后活力一样，即可进行分装与保存，如果活力下降，说明稀释液的配制或稀释操作有问题，不宜使用，并应查明原因加以改进。
6 精液的常温保存和运输
6．1精液分装后在贮精袋上贴好标签，并写清楚公猪的品种、耳号、采精日期（月、日、时）及有关说明。
6．2 用几层与精液同温的毛巾包被好精液，直接放置17℃冰箱中，避免精液温度的突然变化。尽量减少精液保存箱的开关次数，以免造成温度变化对精子的打击。
6．3保存过程中每12小时将贮精袋（瓶）反转一次，防止精子沉淀而引起死亡。
6．4每天检查精液保存箱温度并进行记录，若出现停电应全面检查贮存的精液品质。
6．5精液在运输过程中，要保证温度的恒定，并避免精液的震荡。

7 母猪的输精技术
7．1母猪的发情鉴定
7．1．1发情鉴定：断奶后3—5天母猪开始发情。在断奶后第三天起必须注意观察母猪的行为。每日早、晚两次对母猪进行试情（上午6：30-8：30和下午16：00-17：30），试情选用善于交谈、唾液分泌旺盛、行动缓慢的老公猪，在安静的环境下，当母猪出现站立不动并接受公猪的爬跨（静立反谢）时，即可判断母猪发情成熟。此时即把母猪赶开，以便让公猪集中精力来检查和刺激其它母猪的发情。
7．1．2配种适期：以如下三个标准来判断母猪的配种适期，第一是母猪出现静立反射时间；第二是母猪阴户的颜色由潮红逐渐变成紫红色；第三是母猪的精神状态由不安转为安静。如果在上午出现“静立反射”，则当天下午输精一次，第二天上午再输精一次。如果在下午出现“静立反谢”，则第二天上午第一次输精，第二天下午第二次输精，二次输精间隔时间必须在8—18小时之间。对于个别发情异常的母猪应根据个体不同情况决定配种时间。
7．2输精
7．2．1从保存箱取出的精液，轻轻摇匀，用已灭菌的滴管取1滴放于预热的载玻片，在37℃环境下检查活力，精液活力≥0.7才可进行输精。
7．2．2输精人员消毒清洁双手。
7．2．3用0.1％高锰酸钾水溶液清洁母猪外阴、尾根及臀部周围，再用温水浸湿毛巾擦干外阴部。
7．2．4从密封袋中取出一次性输精管（手不应接触输精管前2/3部分），在其前端涂上专用润滑油或精液，润滑输精管的龟头。
7．2．5将输精管45度角向上插入母猪生殖道内，输精管进入3-4cm之后，顺时针旋转，当感觉有阻力时，继续缓慢旋转同时前后移动，直到感觉输精管前端被锁定（轻轻回拉不动），确认被子宫颈锁定。
7．2．6从精液贮存箱取出品质合格的精液，确认公猪品种、耳号，让精液缓缓升温至35℃左右。
7．2．7   精液流出的速度不能太快，用控制输精袋的高低来调节输精时间，输精时间要求3—5分钟，输完一头母猪后，在防止空气进入母猪生殖道的情况下，把输精管后端一小段折起，插在精液袋中，使其滞留在生殖道内3—5分钟，再把输精管慢慢拉出。
7．2． 8登记母猪配种情况，建立母猪配种挡案。